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如何計算多肽的濃度?
作者:固拓多肽合成公司    發布于:2024年02月23日
摘要:多肽純度是多肽總量中的百分比目標序列。因為肽鍵的形成不是100%有效性,并非所有肽鏈都是目標序列。有些鏈條可能無法完成,或者氨基酸可能無法在某些鏈條上正確組合。這些刪除序列在你的混合物中形成一定比例的肽。為

多肽純度是多肽總量中的百分比目標序列。因為肽鍵的形成不是100% 有效性,并非所有肽鏈都是目標序列。有些鏈條可能無法完成,或者氨基酸可能無法在某些鏈條上正確組合。這些刪除序列在你的混合物中形成一定比例的肽。為了實現所需目標序列的純度,我們使用反相高效液相色譜和質譜進行分析和凈化肽。

白色多肽粉末經過多肽凈化和凍干后,含有一些非多肽成分,如水、吸附溶劑、計數離子和鹽。凈肽含量包括肽在最終產品中的實際百分比。這個數字不同,從50%到90% 不同的是,這取決于純度、合成和凈化的順序和方法。在計算生物分析或其他敏感肽實驗中的肽溶液濃度時,必須考慮肽含量。溶劑的體積可以通過減輕非肽的重量來確定。例如,當使用1mg成品時,產量為80% 的1mg/ml 當你使用800ull液體時,你將使用800ull液體而不是1000ull液體的溶劑。

肽含量并不代表肽的純度。這是兩種測量方法。純度由高效液相色譜法測量,表明肽的存在/零污染和不希望。凈肽含量僅提供總肽百分比和總非肽成分信息,不同于多肽的出現。通過氨基酸分析或紫外線光度法可以準確測量凈肽含量。

根據凍干肽的重量,很難確定具體的肽濃度。冷凍干肽按重量可含10-70% 水和鹽。與疏水肽相比,更親水的肽通常含有更多的水和鹽。如果肽在序列中含有發色團,(W 或 Y 殘基) ,根據這些殘基的消光系數,可以很容易地確定肽濃度。

如何計算多肽的濃度?

計算可采用以下步驟:

使用1厘米細胞在中性 pH 下280nm 處發色殘基的摩爾消光系數:

色氨酸5560AU/mmol/ml

酪氨酸1200 AU/mmol/ml

氨基酸測序中每個發色團的消光系數一般被認為是相加的,即肽的整體摩爾消光系數取決于這些發色團殘基在序列中的類型和數目。

計算: mg 肽/ml = (A280 x DF x MW)/e,其中 A280是溶液在1-cm 細胞中280nm 處的實際吸光度,DF 是稀釋因子,MW 是肽的分子量,e 是每個發色團在280nm 處的摩爾消光系數。

假設的例子: 在1-cm 細胞中,具有序列 GRKKRRQRRRPPQQ (MW = 1847)的肽的50X 稀釋溶液在280nm 處讀取0.5 AU。計算儲備肽溶液中的原始肽濃度:

Mg 肽/ml = (0.5 AU x 50 x 1847mg/mmol)/[(1 x 5560) + (2 x 1200)] AU/mmol/ml = 5.8

注意任何吸光度計算都假設肽是展開的,發色團暴露在外,通常情況下是短的可溶性肽。如果對肽的溶解度或折疊性有疑問,最好在變性條件下(例如6M GdnHCl 或8M 尿素)進行測量。顯然,除非去除變性劑,否則這些肽溶液將變得毫無用處。

如果序列沒有色氨酸或酪氨酸,唯一可行的選擇是做氨基酸分析。

寫到最后:

杭州固拓生物科技有限公司定制多肽合成業務:藥物肽、臨床肽、訂書肽、淀粉肽、醛肽、環肽、二硫鍵搭橋多肽、穿膜肽、各種抗菌肽、美容肽、磷酸化肽、PEG肽、偶聯BSA和KLH抗原肽、各類酸修飾多肽、各種胺類化合物修飾多肽(苯胺、異戊胺、二乙胺)、各類榮光標記(FITC、FAM系列、DOTA、TAMRA系列、CY系列)同位素肽等。固拓生物所有產品僅限科研使用,不得用于人體,如有違反,后果自負。

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